細菌培養檢測技術 

概述 

細菌的培養技術是微生物實驗中基本技術之一。大多數細菌均可用人工方法培養，只有將細菌  培養出來才能對它進行研究和鑒定。 

知識點導航 

一.培養基的種類 

培養基（culture medium）是細菌生長繁殖所需要的各種營養物質的人工制品。適宜的培養基能使細菌在體外迅速生長繁殖，便于對細菌進行分離和鑒別。可分為基礎培養基、營養培養基、選擇培養基、鑒別培養基、厭氧菌用培養基和特殊培養基。 

        （一）基礎培養基只含有細菌生長所需的基本營養成分，應用廣泛，為制備多種培養基的基礎，常見的有肉湯培養基、瓊脂培養基。 

        （二）營養培養基在基礎培養基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有機物，可供營養要求較高的細菌生長需要或增菌用。如結核分枝桿菌培養基中添加雞蛋、馬鈴薯、甘油等。 

        （三）選擇培養基利用不同種類細菌對化學物質的敏感性不同而制成，使分離菌大量繁殖而抑制其它細菌生長的培養基。培養基中含有的抑制劑能抑制非目的菌生長或使其生長不佳，有利于目的菌的檢出和識別。選擇培養基多為固體平板，用于從標本中分離某些特定的細菌。 

        （四）鑒別培養基培養基中加有某些特定成分，如糖、醇類和指示劑等，用于檢查細菌的各種生化反應，以資鑒別和鑒定細菌。 

        （五）厭氧菌用培養基專性厭氧菌須在無氧條件下才能生長，故需在培養基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸鈉等還原劑，降低培養基中氧化還原電勢，并應與外界空氣隔絕，使培養基本身為無氧的環境。 

        （六）特殊培養基為某些需要在特殊條件下才能生長的細菌培養之用。如高滲鹽增菌培養基、高滲糖增菌培養基、改良 Kagan氏培養基等。 

二.培養基的制備 

制備一般培養基的主要過程基本相似，包括調配、溶化、調整 pH、過濾、分裝、滅菌及檢定和保存。 三.細菌檢驗室的注意事項及無菌技術  細菌培養必須隨時為防止污染和病原菌的擴散而進行操作，即無菌操作。

細菌檢驗室的注意事 項如下： 

        1．細菌的培養應在接種罩或無菌室內進行。有條件的實驗室可在超凈工作臺內進行。 

        2．用接種環分離和移種細菌時，用前用后均需滅菌處理。一般采用火焰滅菌法。 

        3．從培養瓶或試管培養物中取標本或移種時，在打開瓶口、管口或關閉前，均要在火焰上通過 2～3次。切不可將含菌材料污染臺面和其他物體。 

        4．如不慎將試管等打破造成菌液污染時，不要驚慌，應立即報告負責人，然后用3％來蘇或5％ 石炭酸處理污染臺面或地面，至少浸泡30分種。 

        5．工作完畢后，用紫外光燈照射30分鐘，或用3％來蘇擦拭臺面，并清洗雙手。 

三、培養法 

根據培養目的和細菌的種類選用適宜的培養方法。常用的有一般培養法、二氧化碳培養法（采用的是二氧化碳培養箱）和 厭氧培養法（采用厭氧培養箱）。 

        （一）一般培養法 一般培養法系指需氧菌或兼性厭氧菌等在需氧條件下的培養方法，故又稱需氧培養法。將已接 種好的置37℃孵箱中培養18～24小時。但標本中菌量很少或難于生長的細菌（如結核分技桿菌）需培養3～7天甚至 l個月才能生長。 

        （二）二氧化碳培養法某些細菌的培養，需要5～10%二氧化碳環境中培養才能生長良好。可采用二氧化碳培養箱，它能自動調節二氧化碳的濃度和溫度，使用極為方便。傳統的方法則采用燭缸法，將培養基放入缸內，點燃蠟燭放在缸中，加蓋（涂以凡士林）密閉。因燃燒而產生CO2大約占5～10%，基本可滿足細菌培養的要求。 

        （三）厭氧培養法厭氧菌標本的采集及運送有特殊的要求及注意事項，應避免正常菌群的污染，盡量少接觸空氣并立刻送檢。厭氧菌的培養法可大致分為：①物理學方法：遮斷空氣法（層積法）、 真空法、空氣置換法、厭氧罐培養、厭氧袋法、厭氧手套箱等。②化學方法：焦性沒食子酸法、硫乙醇酸鈉法、黃磷燃燒法。③生物學方法： 需氧菌共生法、燕麥發芽法。④混合法：真空或氣體置換與焦性沒食子酸法相結合，可根據實際情況選用。