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　　反硝化作用將陸地和水生態系統中的沉積物、水體、土壤、植被等氮庫中的氮轉化成氣態歸還到大氣圈的主要途徑
 

　　反硝化細菌主要通過誘導產生硝酸還原酶和呀硝酸還原酶對硝酸鹽和亞硝酸鹽進行還原能消除污水中的氮，同時又消除了含氮的有害物質。
 

　　是一類兼性厭氧微生物，有分子態氧存在時可化解有機物，利用其作為終電子受體，無分子態氧存在下，反硝化菌利用硝酸鹽亞硝酸鹽作為電子受體，有機物作為碳源及電子供體提供能量。
 

　　有助于研究反硝化脫氮除鱗技術，減輕水體中氮磷污染及其恢復環境PH 的穩定性，還可揭示其在富營養化水體中脫氮除鱗性能提供理論依據 方法原理
 

　　反消化過程對于硝酸根離子消耗速率顯著大于土壤其他生物化學過程對硝酸根離子利用。因此通過適宜的培養條件下，測定介質中硝酸根離子和亞硝酸根離子消失量，利用大可能計數法初步估計反硝化微生物數量。 設備及實驗條件：
 

　　1)分析天平：度0.0001g
 

　　2)高壓蒸汽滅菌鍋
 

　　3)酒精燈
 

　　4)超凈工作臺
 

　　5)恒溫培養箱
 

　　6)鼓風干燥箱
 

　　7)移液管：100-1000ul
 

　　試劑and操作步驟 試劑
 

　　1)奈氏試劑：2g dian化鉀溶于5ml蒸餾水。加入32gHgI2顆粒溶解飽和為止；將12.4gKOH溶于40ml蒸餾水中。將此溶液倒入HgI2溶液中，加水到100ml.
 

　　2)格里斯試劑：0.5g對氨基苯磺酸加到150ml20%稀乙酸溶液中；將1ga-萘胺加到20ml蒸餾水和150ml20%稀乙酸溶液中，混合兩液
 

　　3)二苯胺試劑：0.5g二苯胺溶于20ml蒸餾水以及100ml濃硫酸中 2
 

　　1)每支試管(1.8cmx18cm)中裝入10ml培養基(深層培養，造成厭氧條件，培養基成分及其含量見表6-1)在培養基倒放一小根玻璃管(杜氏發酵管)121攝氏度下滅菌30min 2)選取五個稀釋度(10^-7-10^-3) 沉積物懸液，每一稀釋度的懸液接種四支試管，每管接種1ml。另取四支培養基不接種懸液而接種無菌水作為對照。
 

　　3)將接種好的試管與28攝氏度培養4D后，檢查有無細菌，如有培養液會變渾濁甚至有氣泡出現
 

　　4)吸取1或2滴培養液于白瓷板孔中，加入1，2滴奈氏試劑后出現棕紅色或淺褐色沉淀表明培養基有氨產生。用格里斯試劑和二苯胺分別檢查是否有亞硝酸和硝酸的產生
 

　　5)對反硝化細菌進一步分離和純化，可吸取培養液1ml到新鮮培養液中富集培養，必要時可反復兩次富集培養。吸取濃縮10倍的反硝化細菌培養液2ml，加入到經紫外線消毒的硅膠板上，涂勻置于40攝氏度恒溫箱中干燥至平板表面無積水，然后將富集培養的樣品進行懸液接種培養。14D后觀察菌落生長的情況，并純化單菌落
 

　　6)如需鏡檢取無菌吸管一支，用手指壓緊瓶口，放入培養瓶底部，在松手，此時培養液會自動吸入，取出后涂片，用革蘭氏染色后鏡檢，一般用酒石酸鉀鈉作為碳源的多位革蘭氏陰性菌 注意要點
 

　　試驗中吸管培養皿在實驗開始前做滅菌處理
 

　　吸管每次吸取懸液時，在稀釋液中反復吸入吸出懸液3-5次以減少因管壁吸附而造成的誤差，使懸浮液進一步分散 結果計算
 

　　每克干土菌落數=菌落平均數x稀釋倍數x20/干土所占百分比