分光光度計，又稱光譜儀(spectrometer)，是將成分復雜的光，分解為光譜線的科學儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區和波長范圍為200~380 nm的紫外光區。不同的光源都有其的發射光譜,因此可采用不同的發光體作為儀器的光源。鎢燈的發射光譜:鎢燈光源所發出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后，可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。
光度定義
分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性或定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區，(2)380~780nm的可見光區，(3)2.5~25μm(按波數計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。
原理
分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關系如下式:
A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度;
I。為入射的單色光強度;
I 為透射的單色光強度;
T 為物質的透射率;
k 為摩爾吸收系數;
L 為被分析物質的光程，即比色皿的邊長;
c 為物質的濃度;
物質對光的選擇性吸收波長，以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區，除某些物質對光有吸收外，很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應用標準品或對照品同時操作。
維護保養
分光光度計作為一種儀器，在運行工作過程中由于工作環境，操作方法等種種原因，其狀況必然會發生某些變化，可能影響設備的性能，甚至誘發設備故障及事故。因此，分析工作者了解分光光度計的基本原理和使用說明，并能及時發現和排除這些隱患，對已產生的故障及時維修才能保證儀器設備的正常運行。
1)若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正"0"和""點。然后再測量。
2)指針式儀器在未接通電源時，電表的指針位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調零。
3)比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4)操作人員不應輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5)分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數大，因而可以用于檢測微弱光電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在預熱時，應打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導致工作不穩。
6)放大器靈敏度換擋后，重新調零。
7)比色杯的配套性問題。比色杯配套使用，否則將使測試結果失去意義。在進行每次測試前均應進行比較。具體方法如下;分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長處，石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯:700nm處裝蒸餾水，將某一個池的透射比值調至，測量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內則可以配套使用，若超出此范圍應考慮其對測試結果的影響。
分光光度計分操作中容易出現的幾個典型故障及其排除方法:
1)儀器不能調零。可能原因:
a)光門不能關閉。解決方法:修復光門部件，使其關閉。
b)透過率""旋到底了。解決方法:重新調整""旋鈕。
c)儀器嚴重受潮。解決方法:可打開光電管暗盒，用電吹風吹上一會兒使其干燥，并更換干燥劑。
d)電路故障。解決方法:送修理，檢修電路。
2)儀器不能調""。可能原因:
a)光能量不夠。解決方法:增加靈敏度倍率檔位，或更換光源燈(盡管燈還亮)。
b)比色皿架未落位。解決方法:調整比色皿架使其落位。
c)光電轉換部分老化。解決方法:更換部件。
d)電路故障。解決方法:調修電路。
3) 測量過程中,""點經常變動。可能原因:
a)比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解決方法:用擦鏡紙擦干凈比色皿表面，然后將其安放在比色槽的左邊，上面用定位夾定位。
b)電路故障(電壓、光電接收、放大電路)。解決方法:送修。
4)數顯不穩。可能原因:
a)預熱時間不夠。解決方法:延長預熱時間至30分鐘左右(部分儀器由于老化等原因，長時間處于工作狀態時，也會工作不穩)。
b)光電管內的干燥劑失效，使微電流放大器受潮。解決方法:烘烤電路，并更換或烘烤干燥劑。
c)環境振動過大、光源附近空氣流速大、外界強光照射等。解決方法:改善工作環境。
d)光電管、電路等其它原因。解決方法:送修。
五、提高分光光度計透射比檢定及使用精度的幾種方法
在分光光度計的使用或檢定中,透射比(吸光度)的準確度是衡量儀器工作性能的一項重要指標,它的準確程度直接關系到所測數據的可信性及科學性。所以提高此項指標的使用及檢定準確度顯得尤為重要。
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