紫外分光光度計(jì)，就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計(jì)可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長(zhǎng)的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量。
工作原理
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于物質(zhì)具有自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同。因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
又因?yàn)樵S多物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法對(duì)這些物質(zhì)分別進(jìn)行測(cè)定(定量分析和定性分析)。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。
分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。當(dāng)入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液的吸光度A是吸光物質(zhì)的濃度C及吸收介質(zhì)厚度l(吸收光程)的函數(shù)。
首先確定實(shí)驗(yàn)條件，并在此條件下測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的吸收峰以及其對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)值(大吸收波長(zhǎng));再在選定的波長(zhǎng)范圍內(nèi)(大波長(zhǎng)值處)，分別以(不同濃度)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度和溶液濃度為橫、縱坐標(biāo)繪出化合物溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到其所對(duì)應(yīng)的數(shù)學(xué)方程;接著在相同實(shí)驗(yàn)條件下配制待測(cè)溶液，測(cè)得待測(cè)溶液的吸光度，用已獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出待測(cè)溶液中所需測(cè)定的化合物的含量。
校正方法
紫外分光光度計(jì)的校正方法:分光光度法的最重要的一個(gè)物理化學(xué)量是吸光度。為了獲得準(zhǔn)確的研究結(jié)果，準(zhǔn)確測(cè)得樣品溶液的吸光度是非常重要的。一般，分析結(jié)果的不可靠性與偶然誤差和系統(tǒng)誤差有關(guān)。偶然誤差影響測(cè)量的精密度，可通過足夠數(shù)量測(cè)量的統(tǒng)計(jì)處理來減少;系統(tǒng)誤差影響測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確度，可在大體相同實(shí)驗(yàn)條件下，用比較一種物質(zhì)的準(zhǔn)確測(cè)量結(jié)果，使系統(tǒng)誤差統(tǒng)一起來。而分光光度計(jì)的系統(tǒng)誤差(波長(zhǎng)校正、分光光度計(jì)的慢散光、放大器的線性響應(yīng)、暗電流和比色皿的光程)和操作誤差(溫度改變、儀器讀數(shù)、操作者的改變、使用物質(zhì)的純度、稱量和濃度、pH)對(duì)測(cè)量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關(guān)于操作誤差，多數(shù)情況下，通過嚴(yán)格按操作程序測(cè)量、儀器調(diào)零、準(zhǔn)確稱量等來控制或減少這種誤差的產(chǎn)生
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