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CCK8 細胞毒性實驗檢測 SRM1649b 對皮膚角質形成細胞及皮膚成纖維細胞增殖的影響

      已有研究表明 PAHs 可以破壞皮膚角質層及緊密連接，皮膚屏障受損是皮膚敏感 患者的發病的主要病因，然而 PAHs 是否作用于皮膚細胞的衰老和老化至今仍不清 楚。為此，下面采用了一種成分為 SRM1649b 的 PAHs 標準品來刺激皮膚角質細胞和皮膚成纖維細胞，首先觀察在 SRM1649b 刺激下，這些皮膚細胞是否出現老化現象。 通過不同濃度，以及不同處理時間的 SRM1649b 刺激，HaCaT 及 NHDF 細胞均出現 增殖能力減弱的現象，并且與刺激濃度與時間呈現明顯的負相關（p＜0.05）。而增殖 能力減弱正是細胞出現衰老的首要表型之一。這部分研究結果提示 SRM 1649b 城市塵埃 潛在調控皮膚細胞衰老。

SRM1649b 對皮膚角質形成細胞及皮膚成纖維細胞周期的影響  

      通過 CCK8 實驗檢測發現，SRM1649b 處理時，HaCaT 及 NHDF 細胞均出現增 殖能力減弱的衰老表型。為進一步證實這個現象，在接下來檢測在不同濃度的 SRM1649b 刺激下，HaCaT 及 NHDF 細胞的細胞周期是否出現變化。實驗結果顯示 HaCaT 在 SRM1649b 刺激時，隨著刺激濃度的加大，細胞周期明顯阻滯在 G1/S 期。 同樣為了進一步證實細胞被阻滯在 G1/S 期，我們檢測了 G1 期向 S 期轉化的關鍵調 控分子，Cyclin A 以及 Skp2 的表達量。結果一致顯示，隨著刺激濃度的加大，這兩 個分子的表達受到了極大的抑制。而用 SRM1649b 刺激 NHDF 細胞時，發現細胞周 期不同程度的被阻滯在 G1/S 期，提示 SRM1649b 多個作用途徑的導致皮膚細胞阻滯。 這些結果進一步提示 SRM 1649b 城市塵埃刺激下，皮膚細胞通過細胞周期的阻滯來導致增殖 減弱。

SRM1649b 對皮膚角質形成細胞及皮膚成纖維細胞凋亡的影響

       除了 SRM 1649b 城市塵埃等 PAHs 能導致細胞增殖能力減弱，細胞周期阻滯以外。最重 要的一個方面是，它能破壞被處理的細胞 DNA 損傷修復系統，使細胞積累大量的 DNA 損傷，從而導致細胞死亡，或者惡性突變。這也是皮膚細胞接受這些刺激時發 生病變的最主要因素。為此，在接下來利用凋亡檢測實驗檢測 SRM1649b 刺激時， 皮膚細胞的死亡是否增加？結果同樣顯示：隨著 SRM1649b 刺激濃度的增大，HaCaT 及 NHDF 細胞均出現了大量的凋亡。

總結：SRM1649b 刺激時，HaCaT 及 NHDF 細胞均體現出顯著的衰老表型，即 增殖能力減弱，細胞周期阻滯和細胞凋亡增加。以上三部分實驗結果證實 SRM 1649b 城市塵埃能顯著導致皮膚細胞衰老。

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