環(huán)亞胺毒素GYM標(biāo)準(zhǔn)品CRM-GYM-b是在Cawthron研究所(新西蘭納爾遜)從實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的Kareniaselliformis中分離出來(lái)的。通過(guò)一系列的色譜步驟進(jìn)行純化,用高純甲醇(含0.05%三氟yi酸)溶解純GYM制備了CRM溶液,該溶液與Teflon攪拌棒和磁混合器充分混合,在氬氣中冰浴中冷卻。假藥被分配到琥珀玻璃安瓿和火焰密封在氬下。然后,安瓿被貼上標(biāo)簽,包裝,并立即轉(zhuǎn)移到-80°C的長(zhǎng)期儲(chǔ)存.
環(huán)亞胺毒素GYM標(biāo)準(zhǔn)品CRM-GYM-b以-80°C為參比溫度,采用反向等時(shí)穩(wěn)定性研究設(shè)計(jì)[9]評(píng)價(jià)了Crm-GYM-b在甲醇(0.05%TFA)中的短期穩(wěn)定性,在30天內(nèi),在+37°℃的溫度下未觀察到GYM的降解,表明短期穩(wěn)定性良好。在6個(gè)月后的一項(xiàng)長(zhǎng)期研究中,+37°C的降解確實(shí)變得顯著。長(zhǎng)期穩(wěn)定性評(píng)估的不確定度是用-12°C斜率的標(biāo)準(zhǔn)誤差確定的,以納入CRM-GYM-b的最終不確定度。長(zhǎng)期穩(wěn)定性引起的相對(duì)不確定度為1.14%.建議的儲(chǔ)存溫度為-12攝氏度或以下。
環(huán)亞胺毒素GYM具有相同的大環(huán)結(jié)構(gòu)和亞胺結(jié)構(gòu),6種環(huán)亞胺毒素子類(lèi)“骨架"結(jié)構(gòu)相似度很高(例如,PnTXs 與 SPXs有70%的同源性),見(jiàn)表1。SPXs由溝鞭藻類(lèi)塔瑪亞歷山大藻(Alexandrium Ostenfeldii)產(chǎn)生,1990年在應(yīng)用小鼠生物法對(duì)脂溶性貝類(lèi)毒素檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)。在加拿大貝肉中發(fā)現(xiàn)的SPX E和F,水解開(kāi)環(huán)確定其酮胺結(jié)構(gòu),與 SPX A和B有相同毒性作用。GYM是螺旋形的環(huán)亞胺結(jié)構(gòu),來(lái)源生物是一種凱倫藻( Karenia sp.),已發(fā)現(xiàn)鑒定了5種結(jié)構(gòu)。1994 年,從新西蘭 Foveaux Strait的牡蠣( Tiostrea chilensis )中第一次分離發(fā)現(xiàn),可持續(xù)存在數(shù)年,是一種長(zhǎng)期殘留的毒素成分。
環(huán)亞胺毒素GYM的毒力與其結(jié)構(gòu)有一定的相關(guān)性,如PnTX A -C和 PtTX A -C是立體異構(gòu)體僅33位取代基不同, PnTX A在C-33有個(gè)羧基,毒性比在33位連接甘基的B和C混合物大約低14倍。PtTXs的情況更為顯著, PtTX A 與PtTXs B和C的結(jié)構(gòu)區(qū)別是前者的大環(huán)是附著在硫代羥yi基的2位,后者則附著在1位,而PTXs B和C毒性是PtTX A 的12.5倍。SPX 衍生物(SPX C,去甲基SPx C,20甲基SPX G)注射或口服的急性毒性差別均不大。
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