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超高效液相色譜UPLC使得藥學(xué)工作者可以在更短的時(shí)間、更高的色譜分離度、更少的溶劑消耗下對(duì)中藥復(fù)雜樣品進(jìn)行分析測(cè)定。UPLC在中藥的化學(xué)成分識(shí)別、指紋圖譜及代謝組學(xué)等分析領(lǐng)域逐步得到了應(yīng)用，促進(jìn)了中藥的質(zhì)量評(píng)控。

超高效液相色譜UPLC與不同檢測(cè)器聯(lián)用在中藥分析中的應(yīng)用

1. UPLC與UV、ELSD聯(lián)用在中藥指紋圖譜與定量分析中的應(yīng)用

超高效液相色譜UPLC與不同檢測(cè)器聯(lián)用，可以對(duì)含不同化學(xué)類型的中藥進(jìn)行研究，尤其是結(jié)合指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中顯示出了亮眼的優(yōu)勢(shì)。比較土茯苓藥材的UPLC-UV和HPLC-UV指紋圖譜，結(jié)果顯示HPLC需要75 min才能完成分析，而UPLC在10 min內(nèi)完成了色譜分離，大大節(jié)省了分析時(shí)間。采用UPLC-UV法對(duì)大黃中5種蒽醌衍生物進(jìn)行分析測(cè)定，結(jié)果顯示HPLC需要30min才能完成分析，而UPLC在3min內(nèi)即完成色譜分離，分析效率提高了10倍。針對(duì)HPLC難以分離的紅參類藥材，開展了基于UPLC-UV的紅參研究，得到了高分離度和高純度的色譜指紋圖譜，該研究建立的方法具有專屬性強(qiáng)、分離度高、色譜峰純度高的特點(diǎn)，可用于人參類藥材的品種鑒定和質(zhì)量控制。

針對(duì)一些含皂苷類或化學(xué)成分無紫外吸收的中藥，UPLC-ELSD則優(yōu)勢(shì)盡顯。采用UPLC-UV-ELSD法對(duì)6個(gè)產(chǎn)地28個(gè)批次西洋參藥材的指紋圖譜進(jìn)行聚類分析、主成分分析及相似度評(píng)價(jià)等研究，為西洋參藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)提供了參考方法。建立了UPLC-ESLD法同時(shí)測(cè)定北柴胡藥材中柴胡皂苷a、c、d的含量，是評(píng)價(jià)北柴胡藥材質(zhì)量的一種較好的方法。建立超聲輔助固液萃取與UPLC-ELSD相結(jié)合同時(shí)提取和測(cè)定天然牛黃和替代品中6種膽汁酸含量的方法，測(cè)定結(jié)果顯示，這些樣品的內(nèi)在質(zhì)量存在一定差異。利用UPLC-ELSD指紋圖譜分析和測(cè)定生物堿來研究貝母硫熏蒸過程的潛在破壞作用，該研究表明硫熏蒸對(duì)樣品中的主要活性成分損失較大。

2. UPLC與UV、ELSD聯(lián)用在中成藥指紋圖譜與定量分析中的應(yīng)用

由于中成藥的化學(xué)成分比單味藥材的化學(xué)成分更加復(fù)雜，常規(guī)HPLC往往在較短的時(shí)間內(nèi)很難獲得分離度較高的色譜圖，超高效液相色譜UPLC的高分離度幫助藥學(xué)工作者可以更好地應(yīng)對(duì)分離中成藥中復(fù)雜成分的挑戰(zhàn)。利用UPLC-UV對(duì)益*草顆粒和益*草膏中的益母草堿進(jìn)行了含量測(cè)定，進(jìn)一步完善了益母草制劑的質(zhì)量控制方法。運(yùn)用UPLC-UV對(duì)葛根芩連湯中11種成分進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果表明新建立的質(zhì)控方法具有更好的質(zhì)量評(píng)控力。運(yùn)用UPLC-UV比較了三七原料藥和顆粒劑中5種成分的含量差異，定性、定量地評(píng)價(jià)了三七不同產(chǎn)品的質(zhì)量信息，獲得比較滿意的結(jié)果。建立UPLC-DAD-ELSD切換波長法并應(yīng)用于酸棗仁顆粒中8種成分的含量測(cè)定，對(duì)酸棗仁顆粒的質(zhì)量控制評(píng)價(jià)提供了參考方法。利用UPLC-UV建立了復(fù)方芪麻膠囊的指紋圖譜，并定量測(cè)定了8種成分，建立了該制劑一種比較全面的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。利用UPLC-UV建立了葛*芩*丸的指紋圖譜及7種成分的定量測(cè)定方法，與之前單一質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)相比，提升了其質(zhì)量控制水平。

3. UPLC與MS聯(lián)用在中藥/中成藥成分辨識(shí)中的應(yīng)用

超高效液相色譜UPLC與質(zhì)譜（mass spectrometer，MS）檢測(cè)器聯(lián)用可以改善質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量。由于低流速下色譜峰擴(kuò)散較小，增加了峰濃度，有利于提高離子源的效率。同時(shí)UPLC強(qiáng)大的分離能力有助于目標(biāo)化合物和與之競爭電離的雜質(zhì)峰的分離，從而使MS的靈敏度由于離子抑制現(xiàn)象的減弱而得到進(jìn)一步的提高。故UPLC與MS聯(lián)用可以獲得靈敏度更高、質(zhì)量更好的信息，在提高分離效能、縮短分析時(shí)間的同時(shí)大大提高了檢測(cè)靈敏度，有利于中藥或中成藥中復(fù)雜成分的分析。

運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS快速分析了人參根中的皂苷類化合物，共鑒定出27種化合物，新建立的方法成功地應(yīng)用于分析同一產(chǎn)地、不同生長時(shí)間的人參干燥主根中皂苷的差異。運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS對(duì)未加工和加工的黃連進(jìn)行了化學(xué)成分分析，共鑒定出了13種化合物，其中有3種是初檢測(cè)出，結(jié)合主成分分析結(jié)果表明2種不同加工方式的黃連化學(xué)成分存在顯著差異。在參*扶正注*液中運(yùn)用UPLC-ESI-Q-TOF- MS/MS分離鑒定了81個(gè)主要成分，包括有機(jī)酸、氨基酸、寡糖和生物堿等，為該制劑的質(zhì)量評(píng)控奠定了基礎(chǔ)。建立了HPLC-Q-TOF-MS快速鑒定三葉青化學(xué)成分的方法，并用UPLC-Q-MS測(cè)定三葉青中4種成分的含量，結(jié)果表明建立的UPLC-Q-MS定量分析方法快捷、準(zhǔn)確，為綜合評(píng)價(jià)三葉青的質(zhì)量提供參考。運(yùn)用UPLC- DAD-Q-TOF-MS對(duì)連**瘟膠囊的主要成分進(jìn)行定性、定量分析，通過比較保留時(shí)間和精確質(zhì)量測(cè)定及參考化合物或文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，初步確定了包括類黃酮、苯丙素類、蒽醌類、三萜類等61種化合物。運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS分析了不同產(chǎn)地泥附子的化學(xué)成分差異，為從次生代謝產(chǎn)物多樣性揭示附子道地性的形成機(jī)制提供了新的參考。運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS對(duì)3種不同種類升麻的化學(xué)成分進(jìn)行快速分析，共鑒定出32種共有組分以及8種不同成分，為進(jìn)一步研究3個(gè)不同品種的升麻提供了參考。運(yùn)用UPLC-TQ-MS法研究了丹*軟膠囊中不同活性成分的溶出規(guī)律，為該中成藥的質(zhì)量評(píng)控提供了參考。

4. UPLC與MS聯(lián)用在中藥代謝組學(xué)分析中的應(yīng)用

代謝組學(xué)是目前研究中藥藥理作用機(jī)制和發(fā)現(xiàn)活性成分的手段之一，UPLC-MS技術(shù)為中藥代謝組學(xué)分析提供了技術(shù)平臺(tái)。超高效液相色譜UPLC可與多種類型的質(zhì)譜串聯(lián)，高分辨質(zhì)譜包括飛行時(shí)間（TOF）、四極桿-飛行時(shí)間（Q-TOF）、串聯(lián)飛行時(shí)間（TOF-TOF）及離子阱-飛行時(shí)間（IT-TOF）質(zhì)譜等。UPLC與高分辨質(zhì)譜串聯(lián)可應(yīng)用于中草藥非靶向代謝組學(xué)的研究，尤其是UPLC-Q-TOF/MS能夠更好地用于代謝物和同分異構(gòu)體的分離鑒定。此外，UPLC還可與三重四級(jí)桿或四極桿離子阱（Q-IT）等串聯(lián)應(yīng)用于中藥靶向代謝組學(xué)分析。目前，新型的串聯(lián)質(zhì)譜如四極桿線性離子阱（Q-Trap）質(zhì)譜由于具有較強(qiáng)的定性和定量能力，與UPLC聯(lián)用在中藥非靶向代謝組學(xué)及靶向代謝組學(xué)方面逐漸得到應(yīng)用。研究嶺南山竹子Garcinia oblongifoliaChamp.ex Benth. 的葉、枝和果實(shí)的比較代謝譜和生物活性，使用UPLC-Q-TOF/MS共鑒定了40種化合物，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)分析，揭示了所研究的3種植物代謝物譜的變化和生物活性差異相關(guān)聯(lián)，表明UPLC-Q-TOF/MS可用于鑒定在單個(gè)物種的不同部位中差異表達(dá)的生物活性成分。提出了一種基于目標(biāo)糖組學(xué)和非靶向代謝組學(xué)策略的綜合色譜技術(shù)，利用UPLC-ESI-Q-TOF- MS/MS同時(shí)分離鑒定地黃的碳水化合物和次級(jí)代謝物取得了成功，并進(jìn)一步闡明了碳水化合物和次級(jí)代謝產(chǎn)物的化學(xué)轉(zhuǎn)化機(jī)制，從而揭示了碳水化合物和次生代謝產(chǎn)物之間固有的化學(xué)聯(lián)系。利用UPLC-MS背景扣除法聯(lián)合代謝組學(xué)技術(shù)研究了柴胡-白芍藥對(duì)配伍前后化學(xué)成分的整體變化情況，從整體化學(xué)組成上比較了柴胡-白芍藥對(duì)配伍前后的差異，為其配伍機(jī)制的闡釋奠定了基礎(chǔ)。利用基于超高效液相色譜/電噴霧電離synapt高清質(zhì)譜（UPLC/ESI-SYNAPT-HDMS）結(jié)合模式識(shí)別方法研究了酸棗仁湯治療失眠癥的代謝特征和治療效果，鑒定出20種離子作為“分化代謝物"，結(jié)果表明酸棗仁湯的治療效果可能通過5-羥色胺能激活介導(dǎo)實(shí)現(xiàn)，該研究結(jié)果還表明UPLC/ESI-SYNAPT-HDMS技術(shù)可用于中藥的代謝物分析，開辟了使用代謝組學(xué)解決特殊中藥問題的新視角。利用UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技術(shù)對(duì)復(fù)方祖*麻片抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的血漿代謝組學(xué)進(jìn)行研究，結(jié)果表明復(fù)方祖*麻片主要通過下調(diào)繼發(fā)性病變期溶血磷脂酰*堿的水平而達(dá)到治療效果。

由于樣品組分的分離在先，離子化和檢測(cè)在后，因而能夠有效地減少干擾，諸如基質(zhì)效應(yīng)、離子化抑制、離子化競爭等，大幅度增加代謝物的鑒別數(shù)量和準(zhǔn)確度。UPLC-MS除了分析速度快、樣品無需衍生化等優(yōu)點(diǎn)，UPLC的高分離度使得峰寬變窄、信噪比增強(qiáng)，從而提高了生物樣品分析的選擇性和靈敏度。因此，與傳統(tǒng)HPLC相比，UPLC能獲得中藥更多代謝物的信息，對(duì)于復(fù)雜生物樣品的分離具有顯著優(yōu)勢(shì)，UPLC與MS聯(lián)用在中藥代謝組學(xué)研究中將發(fā)揮越來越重要的作用。

5. UPLC與MS聯(lián)用在中藥真菌毒素分析中的應(yīng)用

目前中藥的安全性檢測(cè)受到越來越多的關(guān)注和研究，但是中藥含有真菌毒素往往是微量（1～100 μg/g）、痕量（0.01～1 μg/g）級(jí)別，常規(guī)分析手段往往很難到達(dá)檢測(cè)限和定量限。超高效液相色譜UPLC與MS聯(lián)用帶來的高靈敏度幫助藥學(xué)工作者可以很好地定量分析中藥中的真菌毒素。建立了一種基于QuEChERS-UPLC-Q-MS/MS法定量測(cè)定白茅根中16種真菌毒素，充分利用UPLC的高分離度，獲得了較好的結(jié)果。建立了UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定麥芽中11種真菌毒素的污染水平，通過相同保留時(shí)間處的特征離子二級(jí)碎片排除了假陽性結(jié)果，檢測(cè)限和定量限分別為0.05～30.00 μg/kg和0.15～87.50 μg/kg，表明該方法可以準(zhǔn)確、靈敏、快速地監(jiān)測(cè)麥芽受真菌毒素污染的狀況。使用UHPLC-MS/MS法測(cè)定淡豆豉、麥芽、薏苡仁和酸棗仁中黃曲霉毒素的含量，結(jié)果顯示不同藥材的黃曲霉毒素G2、G1、B2、B1的檢出限分別為0.04～0.1 μg/kg、0.01～0.02 μg/kg、0.01～0.03 μg/kg和0.02～0.03 μg/kg，表明了該方法具有較高的靈敏度。采用UPLC-MS/MS法對(duì)三七、黨參和柴胡中的黃曲霉毒素進(jìn)行了檢測(cè)，該研究表明分離條件對(duì)分離結(jié)果有一定影響，3種藥材中曲霉屬真菌的污染值應(yīng)得到重視。建立了一種基于ESI-LC/MS同時(shí)檢測(cè)三七藥材中10 種真菌毒素方法，結(jié)果表明該方法凈化效果好、靈敏度高、重復(fù)性好，適用于成分復(fù)雜的三七藥材中多種真菌毒素的定量檢測(cè)。對(duì)決明子、菟絲子、薏苡仁等12種藥材種子中黃曲霉毒素G2、G1、B2、B1和赭*霉*素A進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭*霉*素A在12種藥材種子中的檢出率較低，但一旦檢測(cè)到即為高水平。實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確地同時(shí)測(cè)定多種真菌毒素一直是中草藥分析領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)，UPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)將會(huì)越來越多地應(yīng)用于中藥的真菌毒素分析。

在實(shí)際應(yīng)用中由于UPLC使用的色譜柱柱填料較小，為防止堵塞，樣品前處理要求更加嚴(yán)格。超高效液相色譜UPLC是在HPLC的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，由于UPLC能夠提高色譜分離度、縮短分析時(shí)間、提高分析效率、節(jié)省溶劑消耗，同時(shí)提供智能化的分析，確保分析數(shù)據(jù)的可靠性和高效率，因此將成為中藥分析領(lǐng)域的主要分析手段，其應(yīng)用將會(huì)越來越多。