HPLC色譜柱樣品的前處理和流動相的配制概要
樣品的前處理
1、好使用流動相溶解樣品。
2、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。
3、使用0.45μm(或0.45μm以下)的過濾膜過濾除去微粒雜質。
流動相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
1、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。2、流動相具有一定惰性,與樣品不產生化學反應(特殊情況除外)。
3、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
4、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
5、流動相沸點不要太低,否則容易產生氣泡,導致實驗無法進行。
6、在流動相配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。
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