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儀器網(wǎng) 日立】1958年,D.H.Spackman,W.H.Stein和S.Moore發(fā)明了
離子交換分離、茚三酮柱后衍生氨基酸技術,使得氨基酸分析選擇性高、分析速度快、準確度高。而且成功實現(xiàn)了自動化,是研究的重要里程碑。自此,
氨基酸分析儀被廣泛應用到飼料、藥物、食物等的氨基酸及其類似物的分析中。日立從1962年開始潛心研究氨基酸分析儀,并在技術上取得了巨大的進步。
產(chǎn)品特點:
LA8080全自動氨基酸分析儀采用離子交換
色譜分離和茚三酮柱后衍生技術,是分析氨基酸的專用儀,主要有以下三大特點:
操作簡便
設計符合人體工學,充分考慮到用戶的視野范圍和操作流程。衍生化反應前才將兩種溶液進行實時混合,因此茚三酮溶劑無需冷藏。可直接使用市售的緩沖液和衍生溶劑。
設計緊湊
日立首次采用臺式設計。占地空間小,主機體積縮小了約30%。前置設計綜合考慮了多種因素,方便放試劑瓶和樣品,更換色譜柱和密封配件也十分簡便。
數(shù)據(jù)可靠性高
秉承了之前型號“L-8900”“L-8800”的優(yōu)異性能,采用離子交換色譜法,基本分析條件和之前型號一樣。茚三酮柱后衍生反應的穩(wěn)定性高,因此可在蛋白水解和生理體液分析法中獲得良好的定量分析數(shù)據(jù)。
應用:
圖2所示為通過標準分析法來分析蛋白質水解液的色譜圖。以0.40mL/min流速輸送檸檬酸鈉緩沖液,使粒徑為3μm的陽離子交換樹脂色譜柱(i.d.4.6mm×60mm)保持57℃。然后,以0.35mL/min流速輸送茚三酮試劑與緩沖液混合,135℃時衍生,在570nm和440nm的波長處測量吸光度。
分析30分鐘后,各成分分離度達到1.2以上。另外,天門冬氨酸(Asp)的檢出限為2.5 pmol以下(信噪比=2),峰面積重現(xiàn)性(2 nmol)良好,RSD低于1.0%。
圖2蛋白質水解分析實例
在做蛋白質成分分析時,一般我們使用鹽酸來水解蛋白,但是半胱氨酸、胱氨酸和蛋氨酸很容易被氧化。因此,目前在分析磺丙氨酸(CySO3H)和蛋氨酸砜(MetSON)時,先用過甲酸氧化,然后再加鹽酸水解。如圖5所示為僅分析CySO3H和MetSON的短程序分析應用實例。
圖3過甲酸氧化水解和短程序分析實例
4. 總結
Moore等人發(fā)明的氨基酸分析方法能夠一直沿用至今,是因為他們在設計分離系統(tǒng)和衍生系統(tǒng)時,經(jīng)過反復斟酌,精心設計。聚苯乙烯聚合物的離子交換樹脂與氨基酸的相互作用十分巧妙,芳香族的中性氨基酸如苯丙氨酸和酪氨酸,增強了與色譜柱填料聚合物之間的疏水相互作用,從而實現(xiàn)了良好的分離。茚三酮的柱后衍生方法對樣品中的雜質有較高的選擇性,用戶只需認真完成去蛋白以及過濾處理,即可獲得高可靠性的分析結果。
“前人栽樹,后人乘涼”,我十分驚嘆于前人的智慧并滿懷感激,今后日立會將氨基酸分析技術進一步發(fā)揚光大。
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