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110026 人髓過氧化物酶(MPO)定量檢測試劑盒(ELISA)

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110026人髓過氧化物酶(MPO)定量檢測試劑盒(ELISA):英文名稱:Human Myeloperoxidase (MPO) ELISA KIT。本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。僅供科研使用,定量檢測血清、血漿、細胞培養上清液中人髓過氧化物酶(MPO)的濃度。

詳細信息 在線詢價

僅供科研使用,不得用于臨床檢驗。

 

人髓過氧化物酶(MPO)定量檢測試劑盒(ELISA)說明書

 

【產品名稱】

通用名稱:人髓過氧化物酶(MPO)定量檢測試劑盒(ELISA)

英文名稱:Human Myeloperoxidase (MPO) ELISA KIT

 

【包裝規格】                           

48人份/盒,96人份/盒

 

【預期用途】

僅供科研使用,定量檢測血清、血漿、細胞培養上清液中人髓過氧化物酶(MPO)的濃度。

 

 

【檢驗原理】

人髓過氧化物酶(MPO)定量檢測試劑盒(ELISA)采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。在預包被抗人髓過氧化物酶(MPO)抗體(固相抗體)的微孔酶標板中,加入人髓過氧化物酶(MPO)校準品和待測樣本,再加入另一株HRP標記的抗人髓過氧化物酶(MPO)抗體(酶標抗體),經過溫育與充分洗滌,去除未結合的組分,在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標抗體的夾心復合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,產生藍色產物,在終止液(2M 硫酸)作用下,zui終轉化為黃色,在酶標儀上測定吸光度(OD值),吸光度(OD值)與待測樣品中人髓過氧化物酶(MPO)的濃度正相關。擬合校準品曲線,可以計算出樣本中人髓過氧化物酶(MPO)的濃度。

 

 

【主要組成成分】

主要成分

組分

數量

主要成分

校準品

0.5ml/管*6管

抗原配制的6個濃度標準品

包被微孔板

96T

預包被固相抗體

HRP標記抗體

6mL

HRP標記的檢測抗體

底物液A

6mL

過氧化脲工作液

底物液B

6mL

TMB工作液

20×濃縮洗滌液

30mL

含0.15%Tween20的PBS

說明書

1

--

自封袋

1

--

不干膠

2

--

校準品濃度依次為:10、5、2.5、1.25、0.625、0 ng/ml。校準品已經通過測試,結果表明HBs抗原陰性,HIV1、HIV2和HCV抗體陰性,由于不存在一種試驗方法能夠*保證沒有這些物質,本品必須按照具有潛在的感染性進行處理,處理過程應當遵循通用的安全措施。

 

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳膠手套

8、質控品(可從藍圖生物科技產品研發系統中選擇)

 

【儲存條件及有效期】

  1、2-8℃保存,切勿冷凍,有效期6個月。

  2、開封使用后,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

  3、開封后,按照建議的條件保存,校準品、包被微孔板和HRP標記抗體,有效期為14天,其他成分在標簽標明的有效期內是穩定的。

 

【適用儀器】

  半自動的酶標儀,如Thermo MK3,或者國產酶標儀。

 

【樣本要求】

  樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

1、細胞培養上清:4000rpm條件下離心20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20以下,避免反復凍融。

2、血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在- 20以下,避免反復凍融。

3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20以下,避免反復凍融。

 

樣本保存和穩定性

樣本在2-8條件下,可以儲存72h,或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復凍融,使用時在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。

 

【檢驗方法】

試劑準備

1、使用前,所有的組分都要至少復溫30min,確保充分復溫到室溫。

2、濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液,會有結晶產生,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水,按1:20稀釋,即1份的濃縮洗滌液,添加19份的蒸餾水。

3、底物:底物液A和B,在使用前,按1:1體積充分混合,混合后15分鐘內使用。

 

操作程序

1、所有試劑和組分都先恢復到室溫,標準品、質控品和樣品,建議做復孔。

2、按前面試劑準備中描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。

3、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。

4、設置標準品孔、樣本孔和空白孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,樣本孔加待測樣本50μL,空白孔不加。

5、除空白孔外,標準品孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100μL。

6、用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

7、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。

8、如此重復4次(共洗板5次)。若使用自動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高檢測的精度。洗板結束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應板。

9、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。

10、所有孔加入終止液50μL,在酶標儀上讀取各孔吸光度(OD值)。

 

【檢驗結果的解釋】

檢測完成后,以標準品濃度做為縱坐標,對應的吸光度(OD值)作為橫坐標,利用計算機軟件,采用四參數Logistic曲線擬合(4-pl),創建標準曲線方程,通過樣本的吸光度(OD值),利用方程計算樣品的濃度值。

如果樣品被稀釋,通過上述方法測的的濃度值,要乘以稀釋倍數,才是樣品的zui終濃度。

【檢驗方法的局限性】

1、僅供科研使用,不得用于臨床診斷。

2、在試劑盒標示的有效期內使用,過期產品不得使用。

3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

5、如果樣本值高于zui高標準品濃度值,請將樣本適當稀釋后,再重新測定。

6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結果,檢測前,請排除該因素。

7、通過其他方法得到的檢測結果,與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。

 

【產品性能指標】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝,無破損漏氣。

2、劑量反應曲線線性

校準品劑量反應曲線相關系數r值,大于等于0.9900。

3、精密度

批內精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在同一個板塊內精度評估。批內變異系數CV%小于10%。

批間精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在不同板塊內精度評估。批間變異系數CV%小于15%。

4、靈敏度

zui低檢出劑量小于0.062 ng/ml。

5、回收率

三組已知的高、中、低濃度樣品,進行五次回收率評估,回收率在85%-115%之間。

6、特異性

本試劑盒識別天然和重組人髓過氧化物酶(MPO),與結構類似物無交叉。

7、穩定性

    2℃-8℃保存,有效期6個月。

【注意事項】

生物安全

1、檢測必須符合實驗室管理規范的規定,嚴格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。

2、試劑盒的液體組分中,含有proclin-300防腐劑,可能引起皮膚過敏反應,避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入煙霧。戴上防護手套,實驗完成后*洗手。

 

技術提示

1、混合蛋白溶液時,避免起泡。

2、加校準品與樣本時,每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應該懸臂加樣,避免交叉污染。

3、合適的溫育時間,和充分的洗滌步驟,是保證實驗結果準確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體,保存過程中變為藍色,代表底物溶液已經失效,不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序*,加入終止液后,藍色底物產物,會瞬間變為黃色。

6、實驗中,用剩的板條,應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

7、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

 

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑,所有污染性的一次性材料,應當遵循傳染性或潛在傳染性產品的處理程序,每個實驗室都有責任根據其實驗的類型和危險性級別,進行廢物和污物的處理,同時要嚴格依照有關規定對待所有的廢物和污物。

【基本信息】

  企業名稱:泉州市藍圖生物科技有限公司

  生產地址:福建省泉州市泉港區界山鎮藍圖生物科技園A棟501室

  號碼:355902222

  郵    箱:355902222

 

【說明書批準日期及修改日期】

  批準日期:2013.05.12

  *次修改日期:2016.02.16


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