免疫共沉淀(Co-IP)實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)材料：蛋白質(zhì)試劑、試劑盒：RIPA Buffer PBS Protein A agarose 瓊脂糖 還有考馬斯亮藍(lán)染色液
儀器、耗材： 離心機(jī) 搖床 EP管 細(xì)胞刮子 離心管 培養(yǎng)板 電泳儀 電泳槽 高效液相色譜儀
免疫共沉淀(Co-IP)實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)步驟
一、試劑準(zhǔn)備
1.預(yù)冷PBS，RIPA Buffer，細(xì)胞刮子（用保鮮膜包好后，埋冰下），離心機(jī)。
2.用預(yù)冷的PBS洗滌兩次細(xì)胞，zui終一次吸干PBS。
3.加入預(yù)冷的RIPA Buffer(1 ml/107個(gè)細(xì)胞、10 cm培養(yǎng)皿或150 cm2培養(yǎng)瓶，0.5 ml/5×106個(gè)細(xì)胞、6 cm培養(yǎng)皿、75 cm2培養(yǎng)瓶）。
4.用預(yù)冷的細(xì)胞刮子將細(xì)胞從培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶上刮下，把懸液轉(zhuǎn)到1.5EP管中，4℃，緩慢晃動(dòng)15 min（EP管插冰上，置水平搖床上）。
免疫共沉淀(Co-IP)實(shí)驗(yàn)
其原理是：當(dāng)細(xì)胞在不是變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的很多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保存了下來。比如用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。目前多用精制的proreinA預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，beads上的proreinA就能吸附抗原達(dá)到精制的目的。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
上海劍鈍生物技術(shù)有限公司成立于2005年，公司位于上海長(zhǎng)江軟件園，實(shí)驗(yàn)室面積600多平方米。公司目前具備*的生物學(xué)、醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，能夠?yàn)閺V大客戶提供醫(yī)學(xué)科研樣本檢測(cè)、合作研究、開發(fā)及生產(chǎn)服務(wù)。 我們擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室、*的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和經(jīng)驗(yàn)豐富的科研技術(shù)人員。技術(shù)團(tuán)隊(duì)包括研究員（博士后）2人，助理研究員（博士）4人，核心研究員（碩士）15人，主要致力于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、生物化學(xué)、病理檢測(cè)、基因檢測(cè)等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣。通過高度細(xì)分、*的服務(wù)平臺(tái)，為廣大客戶提供了完善的技術(shù)解決方案和服務(wù)。目前，協(xié)助發(fā)表的SCI及國(guó)家核心期刊上的學(xué)術(shù)論文達(dá)兩千余篇，涉及臨床醫(yī)學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域。
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