一、離子交換層析

　　離子交換層析根據(jù)化合物的凈電荷進行分離。帶負電荷或正電荷的官能團共價結合于固相載體基質，分別成為陽離子交換劑和陰離子交換劑。當一個帶電荷的分子加入到帶有相反電荷的交換劑時，它就會被吸附，同時，帶相同電荷的離子和中性分子則被洗脫到層析柱的外水體積里。帶電荷分子的結合是可逆的，通常可用鹽或PＨ梯度洗脫吸附的分子。

　離子交換層析可以有多種應用，包括分離和純化生物分子，分離無機離子，試劑和水的去離子化，鹽轉換以及去除金屬離子、溴化乙錠和ＳＤＳ。

　兩性化合物的分離策略。如果分子在ＰＨ高于其等電點時穩(wěn)定，可使用陰離子交換樹脂。如果分子在ＰＨ低于其等電點時穩(wěn)定，則使用陽離子交換樹脂。

美國GE（原安瑪西亞）層析填料（常用型號）

二、親和層析

　　親和層析過程中，配體與待分離分子具有特定的親和力，共價結合于固體之上。樣品混合液加入到這些基質形成的層析柱載體時，目標分子（如蛋白、多肽、ＤＮＡ片段等）與固定在基質上的配體結合，而混合液中不具親和力的組分則析出。通過改變ＰＨ值、濃鹽度、使用有機溶劑或加入與配體競爭性結合的分子，則可以將目標分子洗脫下來。

美國GE（原安瑪西亞）層析填料（常用型號）

親和層析填料：

金屬螯合填料：

17-0920-07填料名稱：IMACSepharoseHighPerformance

17-0921-09填料名稱：IMACSepharose6FF

三、分子量排阻層析（又名分子篩層析、凝膠過濾層析）

分子量排阻層析（ＳＥＣ）又稱凝膠過濾層析，它根據(jù)分子量大小來分離分子。凝膠基質由特定大小孔隙的球形小珠組成不同分子量的分子從孔中排阻通過，發(fā)生分離。小分子進入孔內(nèi)，會延滯它們通過層析柱，而大分子避開孔，洗脫入層析柱外水體積。因此，樣品根據(jù)分子量大小進行分離，并依照分子量遞減順序洗脫。

依據(jù)層析目的和所需的分辨率來選擇操作條件和介質。分子量排阻層析中一種常規(guī)的方法為基團分離，包括：

脫鹽－目標分子洗脫出來，而小分子保留在凝膠孔內(nèi)。為了獲得理想的分離，基質的分子量排阻限度應比目標分子小。

分級分離-一定分子量范圍的分子在凝膠基質內(nèi)分離。使用這種方法時，目標分子應當在凝膠的分級分離范圍以內(nèi)。

分子量排阻層析常規(guī)應用包括蛋白分級分離及分子量確定、核酸分離、質粒純化和多糖分級分離。

層析分辨率取決于顆粒大小，孔徑大小、流速、層析柱尺寸和樣品體積。通常，低流速（2-10cm/hr）、細長柱、小顆粒凝膠、小樣品體積（總床體積的1-5%）、2倍的分子量差異以及相同的溶液粘度，可以獲得分辨率。如果用于脫鹽，様品體積則可達總床體積的30-40%，并可使用短粗柱。

美國GE（原安瑪西亞）層析填料（常用型號）

凝膠過濾填料：

四、疏水作用層析

疏水作用層析（HIC）根據(jù)化合物的疏水性進行分離；帶有疏水和親水基團的樣品分子在高鹽緩沖液中加入到HIC層析柱，緩沖液中的鹽降低了樣品的溶解度。由于總溶解度下降，裸露在外的疏水基團就被介質吸附。化合物的疏水性越強，需要加入用來提高結合力的鹽就越少。通常依照疏水性的遞增次序，用遞減鹽梯度來洗脫層析柱內(nèi)的樣品，也可以在洗脫中加入溫和的有機調(diào)節(jié)物或洗滌劑來完成。

美國GE（原安瑪西亞）層析填料（常用型號）

疏水層析填料：

五、羥基磷灰石層析

羥基磷灰石（Ｃａ５（ＰＯ４）３ＯＨ）２是磷酸鈣的一種，對分離一些其它層析和電泳技術無法區(qū)分的蛋白具有*的選擇性和分辨率。羥基磷灰石層析適應從初捕獲到完善的任何步驟。應用于以下分離和純化：

·不同種類的單克隆和多克隆抗體·區(qū)分超螺旋與線性ＤＮＡ

·輕鏈組成不同的抗體·區(qū)分雙鏈ＤＮＡ與單鏈ＤＮＡ

·抗體片斷·病毒·同工酶