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ANNEXIN V- FITC/PI 凋亡檢測試劑盒
ANNEXIN V- FITC/PI 凋亡檢測試劑盒操作步驟:
1. 細胞樣品的準備:
a)對于貼壁細胞:小心收集細胞培養液到一離心管內備用。用不含 EDTA 的pancreatin消化細胞,至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。1000rpm 左右離心 5min,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞無法離心至離心管底,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約 50µl 左右的培養液,以避免吸走細胞。加入約 1ml 4℃預冷的 PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清。
b)對于懸浮細胞:1000rpm 左右離心 5min,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞無法離心至離心管底,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約 50µl 左右的培養液,以避免吸走細胞。加入約 1ml 4℃預冷的 PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清。
2. 用去離子水按 1:9 稀釋 Binding Buffer (2ml 10x Binding Buffer+18ml 去離子水);
3. 用 1x 結合緩沖液重新懸浮細胞,調節其濃度為 1-5×106/ml;
4. 取 100µl 的細胞懸液于 5ml 流式管中,加入 5µl Annexin V/FITC 混勻后于室溫避光孵育 5 分鐘;
5. 加入 5µl 的碘化丙錠溶液(PI),并加 400µl PBS,立刻進行流式或熒光顯微鏡檢測。