氨基酸是構(gòu)建生物機體的眾多生物活性大分子之一,是構(gòu)建細胞、修復組織的基礎(chǔ)材料。它被人體用于制造抗體蛋白、血紅蛋白、酶和激素以維持和調(diào)節(jié)新陳代謝,是一切生命之源。
由于氨基酸的重要性,合適可靠的檢測方案將成為評估食品、飼料、藥物及生理樣品中氨基酸指標的重要選擇。
HPLC—柱后衍生法,50多年來作為氨基酸領(lǐng)域的重要檢測手段,因為其高效的測試準確性和重現(xiàn)性,深受廣大用戶的信賴。
氨基酸檢測在藥物、食品、飼料中的主要應用有
● 通過分析氨基酸組鑒定多膚和蛋白質(zhì);
● 原料藥和中間體中的雜質(zhì)和有關(guān)物質(zhì)的測定;
● 藥物中單個或總氨基酸的定量, 包括復雜基質(zhì)中標記物的測定;
● 重組蛋白生產(chǎn)過程的控制;
● 確定氨基酸組成也是保證食品和飼料營養(yǎng)價值的必要條件;
● 用于產(chǎn)品質(zhì)量及過程監(jiān)測。
衍生方法介紹
Pickering Laboratories根據(jù)上述應用的檢測對象的不同,將衍生方法分為OPA衍生法和茚三酮衍生法,兩種方法都可以與任何氨基酸陽離子交換柱和洗脫液組合使用。其中我們稱為Trione ®的茚三酮試劑,也廣泛應用于氨基酸分析儀中。
OPA法與茚三酮法區(qū)別見下表:
氨基酸衍生法 | ||
_ | Trione®試劑分析法 | OPA試劑分析法 |
衍生試劑 | TlOO-預混試劑 ;自生產(chǎn)日期起計算, 4個月保質(zhì)期(950 ml/瓶) TlOOC -預混試劑;自生產(chǎn)日期起計算, 4個月保質(zhì)期(950 mL/瓶) T200 - 2部分試劑,混合后使用,從生產(chǎn)之日起12個月保質(zhì)期;4組/箱 (900mL/瓶) | OD104-氨基酸分析用OPA稀釋液; O120-OPA試劑(5g/瓶) 3700-2000 -疏基化合物。(10g/瓶) 這三種產(chǎn)品都是用于氨基酸OPA分析法 |
適用樣品 | 一級和二級氨基酸 | 一級氨基酸 在與OPA反應之前需要檢測二級氨基酸氧化步驟。使用氧化步驟時,一級氨基酸的檢測靈敏度會有所降低。 |
檢測器 | UV/VIS | FLD |
儀器靈敏度 | 10 pmole (在色譜柱上) | 2 pmole (在色譜柱上) |
色譜柱&洗脫液 | 適用于任何陽離子交換柱氨基酸分析法 | 與任何用于氨基酸分析的陽離子交換柱配合使用 |
配置 | 單泵Ony×PCXI vector PCX+ 0.5 m L反應器 | 單泵Ony×PCX/ vector PCX+ 0.15 ml反應器。 *需要帶有0.5 mL和0.1 mL反應器的雙泵OnyxPCX來檢測二級氨基酸。 在此模式下, 初級氨基酸的靈敏度會降低。 |
色譜柱的選擇
圖1:鈉柱氨基酸分析選擇
圖2:鋰柱氨基酸分析選擇
圖3:氨基酸標品
圖4:豆粕樣品
圖5:水解單克隆樣品
Pickering產(chǎn)品
完整解決方案
歐洲藥典8.0對于氨基酸的柱后衍生茚三酮法做了詳細的要求,藥典對于包括化學、 動物、 人或草藥來源的活性物質(zhì)、賦形劑和制劑,順勢療法制劑,抗生素,制劑和容器等都有所要求。
Pickering Laboratories 將歐洲藥典作為測試依據(jù),為客戶提供完整的氨基酸分析解決方案。
Pickering 柱后衍生儀
解決方案包括Onyx PCX/Vector PCX 柱后衍生儀器、分析柱、保護柱、緩沖液和Trione ®茚三酮試劑。并且對方法進行了優(yōu)化, 在符合藥典各項體系適宜性要求的同時,提高了分析的靈敏度及分析效率。
Pickering全套試劑包
圖6:依據(jù)歐洲藥典8.0法測試氨基酸
關(guān)于Pickering Laboratories
美國Pickering Laboratories公司是僅有的專業(yè)提供人工測試體液和柱后衍生化學試劑、色譜柱、分析方法等柱后衍生分析整體解決方案的機構(gòu),其不斷創(chuàng)新及良好的信譽被眾多的美國政府機構(gòu)如EPA、ATF、FDA、AOAC和很多廠商所認可。
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