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Gaud Pinel1 ，Sandrine Roulet-Rochereau1 ，Marie-Hélène Le Breton1,2 ， 
Sylvain Chéreau1 ，Fabrice Monteau1 ，Paul Silcock3，與Bruno Le Bizec1 
1Laboratoire d’ Etude des Résidus et Contaminants dans les Aliments (LABERCA)，ONIRIS，Nantes，France 法國LABERCA 化學實驗室 
2瑞士洛桑雀巢公司，雀巢研究中心 
3 英國曼徹斯特沃特世公司 

應用優勢 
牛注射了重組牛生長激素，過幾天后檢測藥物在牛體內的殘留。得到了明確的檢測結果，可用于此類藥物的使用監控。 
■ Xevo TQ MS 的高靈敏度可準確檢測生物基質中的重組牛生長激素（rbST ），符合2002/657/EC 要求。 
■ 方法的靈敏度高，非常適合用于在給藥幾天后檢測動物血液中痕量的殘留激素藥物。 
■ Xevo TQ MS 提供重復性好的結果，且基質效應很低，這對于藥物監控計劃實施中的常規分析來說是十分重要的。 

沃特世解決方案 
■ ACQUITY UPLC，Xevo TQ MS 
關鍵詞 
■ rbST，reST ，生長激素，食品安全 

簡介 
動物性食品安全控制是政府、法規機構與組織的重要任務，應該在食品進入消費環節之前就對食品安全進行有效的檢測和控制。因為上市后的食品安全事件可能影響消費者信心與貿易。 
重組牛生長激素（rbST ），又稱為生長激素，在一些國家通常作為豬或牛的生長促進劑，將其用于乳牛可以增加牛奶產量1,2 。然而，生長激素的使用有嚴格的法律規范，在歐盟國家是*禁用的3,4 。但是，這項法規的執行面臨著很大的困難，主要是因為缺乏有效的分析工具來檢測是否存在濫用該激素的情況。此分析的困難在于生長激素本身是蛋白質，且在生物基質中濃度較低，而樣品基質組成又十分復雜。至今為止，分析方法僅僅局限為酶聯免疫檢測，這個方法不能將天然存在的激素與重組激素分離開來；盡管也有其它應用報導，但都不能專屬性很強地檢測生理水平的重組牛生長激素（rbST）5,6 。 
直到zui近才開發出了一項直接檢測生物基質中重組牛生長激素（rbST ）的方法7,8 ，這個方法是將重組生長激素用*進行水解，然后分析生長激素專有的N-端肽鏈。事實上，天然激素的N-端氨基酸是*，而重組激素的N-端氨基酸是*。 
此應用文章展示了使用Waters® XevoTM TQ MS 分析注射了重組激素的動物血漿樣品中的藥物。在注射后幾天進行檢測，可清晰檢測出結果，展示了*水平。 

實驗部分 
重組激素標準品 
重組牛生長激素（rbST ）標準品與重組馬生長激素（reST ）分別購自哈勃UCLA 醫學中心國家激素與垂體項目（美國托蘭斯）以及Bresagen 有限公司（澳大利亞T hebarton ）。 

樣本制備 
重組牛生長激素在血漿中的樣本提取、純化步驟依照文獻進行。7,8 

MS條件 
MS系統：XEVO TQ MS 
離子化模式：ESI+ 
毛細管電壓：3 kV 
源溫度：150℃ 
脫溶劑溫度：550℃ 
脫溶劑氣速：800 L/小時 
碰撞氣流速：0.15 mL/分 

MRM方法參數 
MRM通道通過Masslynx軟件中的InliStartTM行獨立的參數優化，詳見表2。 

結果與討論 
LC/MS/MS條件優化 
ACQUITY UPLC系統對*水解的N-端肽片段又很好的保留和分離效果，總運行時間8分鐘，重組牛生長激素（rbST ）與重組馬生長激素（reST ）的N-端保留時間分別為2.74和2.79分鐘（圖1）。 
重組牛生長激素（rbST）N-端肽鏈在電噴霧正離子模式產生雙電荷的離子[M+2H]2+=913 ，將此離子作為母離子。根據2002/657/EC歐盟委員會決議10 ，MRM方法中選擇了兩個子離子用于確證；重組馬生長激素（reST ）作內標物，在樣品中的濃度為100 ng/mL ，其N-端肽鏈在電噴霧正離子模式產生三價電荷的離子[M+3H]3+= 623 ，將其作為母離子。 

動物注射生長激素后體內rbST的檢測 
此方法用于檢測注射生長激素后的動物樣品。對奶牛一次性皮下注射500mg Lactatropin®藥物，然后取樣分析。 

圖1 對10 ng/mL的rbST和reST標準品進樣，UPLC(ESI+)/MS/MS 的MRM特征離子信號分別為rbST 的N-端碎片離子為913>774和913>1047；reST的N-端碎片離子為623 >795和623 >530 



圖2 使用UPLC（ESI+）/MS/MS分析注射藥物前（D0）與注射后兩天（D2）采集到的血漿樣本的的MRM特征離子信號圖譜 

圖2顯示了注射藥物前采集到的血漿樣本得到的譜圖（D0）以及注射藥物兩天后血漿樣本的譜圖（D2）。
圖2的結果表明：可以在給動物注射生長激素兩天后在奶牛的血漿中檢測到rbST 。對采集到的特征信號分析表明此方法可以對生長激素這個蛋白進行明確的確證，符合2002/657/EC 的要求，同時確認了檢測方法的靈敏度。 
與預計的動物血漿蛋白水平一致。基質干擾幾乎檢測不到，在實際血漿樣本中的良好線性可保證對rbST 的進一步相對定量結果，在注射生長激素兩天后還可以檢測到血漿中50 ppb 的藥物，與以往實驗結果一致7,11 。表3顯示了平行進樣10 次得到的分析結果，這充分說明Xevo TQ MS 在檢測低含量復雜樣品時能夠提供重復性好的數據。 

結論 
■ Xevo TQ MS 的高靈敏度可準確檢測生物基質中的重組牛生長激素（rbST ），符合2002/657/EC 要求
■ 方法的靈敏度高，非常適合用于在給藥幾天后檢測動物血液中痕量的殘留激素藥物 
■ Xevo TQ MS 提供重復性好的結果，且基質效應很低，這對于藥物監控計劃實施中的常規分析來說是十分重要的 

參考文獻 
[1] Burton JL, McBride BW, Block E, Glimm DR and Kennelly JJ. A review of bovine growth hormone. Canadian Journal of Animal Science. 1994; 74: 167-201. 
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