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酶標(biāo)儀與分光光度計(jì)的區(qū)別與優(yōu)缺點(diǎn)

2018年10月29日 16:34

　　【中國(guó)儀器網(wǎng) 解決方案】酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)都是實(shí)驗(yàn)室常用的分析測(cè)量工具，它們的測(cè)定原理是相同的，都是使用朗伯-比耳定律，測(cè)定的都是樣本的吸光度。

　　一、酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)的三大差別

　　酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器又稱微孔板檢測(cè)器。可簡(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來進(jìn)行分析。測(cè)定一般要求測(cè)試液的終體積在250μL以下，用一般光電比色計(jì)無法完成測(cè)試，因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求。

　　分光光度計(jì)，又稱光譜，是將成分復(fù)雜的光分解為光譜線的科學(xué)儀器。測(cè)量范圍一般包括波長(zhǎng)范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200～380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。

　　同為，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測(cè)定吸光度的儀器，酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)存在一些不同之處，具體差別體現(xiàn)在以下三個(gè)方面：

　　（1）盛裝待測(cè)溶液的容器：

　　分光光度計(jì)用的是比色皿，酶標(biāo)儀使用的是塑料微孔板(酶標(biāo)板)。比色皿只能起到盛裝溶液的作用，每個(gè)比色皿一次只能盛裝一種溶液。酶標(biāo)板常用透明的聚乙烯材料制成，對(duì)抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用，因此用它作為固相載體，酶標(biāo)板通常為48孔或96孔，每個(gè)微孔可以盛裝不同的溶液。

　　（2）光路的方向：

　　分光光度計(jì)是水平光路，而酶標(biāo)儀則是垂直光路。由于酶標(biāo)板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測(cè)溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。垂直光的特點(diǎn)是標(biāo)本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小，不足之處是受被測(cè)樣本液面是否水平、酶標(biāo)板透光性、孔底是否平整等的影響較大。

　　（3）光路的長(zhǎng)度：

　　由于光密度(OD值)與吸光系數(shù), 待測(cè)組分的濃度以及光路長(zhǎng)度成正比關(guān)系。

　　分光光度計(jì)采用的比色杯的寬度通常是1cm，所以光路長(zhǎng)度固定為1cm。因此不同儀器，不同批次測(cè)量的數(shù)據(jù)具有同樣的可比性。

　　而酶標(biāo)儀采用的是垂直光路, 所以光路的長(zhǎng)度應(yīng)該是液體液面的高度。所以測(cè)得的值受到樣品的體積的影響。

　　二、酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)的優(yōu)缺點(diǎn)比較

　　分光光度計(jì)：

　　優(yōu)點(diǎn)：1、檢測(cè)波長(zhǎng)范圍較寬；2、加樣量不一致對(duì)測(cè)量結(jié)果沒有影響。

　　缺點(diǎn)：1、工作量大，操作繁瑣，耗時(shí)；2、耗試劑；3、結(jié)果穩(wěn)定性差，重復(fù)性較差，誤差較大；4、對(duì)于微量物質(zhì)，難以檢測(cè)到。

　　主要應(yīng)用領(lǐng)域：藥品檢驗(yàn)、藥物分析、環(huán)境檢測(cè)、衛(wèi)生防疫食品、化工、科研等領(lǐng)域?qū)ξ镔|(zhì)進(jìn)行定性、定量分析。

　　酶標(biāo)儀：

　　優(yōu)點(diǎn)：1、一次性處理樣品量大，省時(shí)；2、樣本、試劑用量少；3、操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，檢測(cè)速度快、效率高。

　　缺點(diǎn)：1、酶標(biāo)儀96孔板在紫外光區(qū)有較強(qiáng)的紫外吸收，應(yīng)盡量避免在300nm以下使用酶標(biāo)儀進(jìn)行含量測(cè)定；2、必須確保微孔板每個(gè)孔加樣量嚴(yán)格一致，對(duì)實(shí)驗(yàn)者的操作技能提出了更高的要求。

　　主要應(yīng)用領(lǐng)域：臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)等。

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