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薄層色譜的操作方法

   2019年11月28日 11:02  
  【儀器網 使用手冊】薄層色譜是一種較新的色譜法,兼具柱色譜和紙色譜的優點,能快速分離和定性分析少量物質。薄層色譜性能優異,操作也較簡單。
 
  1.選擇吸附劑
 
  吸附劑一般要求直徑為10~40μm,需要根據被分離物質的性質選擇,常用的吸附劑有以下幾種。
 
  硅膠:微酸性極性固定相,適用于酸性、中性物質分離
 
  氧化鋁:堿性極性固定相,適用于堿性、中性物質分離
 
  纖維素:含有羥基的極性固定相,適用于分類親水性物質。
 
  聚酰胺:含有酰胺基極性固定相,適用于酚類、醇類化合物的分離。
 
  2.制備薄層板
 
  薄層板的質量將決定分離的效果,應該盡量均勻且厚薄一致。薄層板的制備主要有兩種方法:
 
  ①將潔凈干燥的玻璃板置于鋪板器中間,在鋪板槽中倒入糊狀物,自左向右推,將糊狀物均勻地涂在玻璃板上。
 
  ②將調成糊狀物倒在玻璃板上,或用角匙舀到玻璃板上,再用玻璃棒或角匙鋪平并用手捏住玻璃板一角,輕輕碰敲桌面,使薄層表面均勻并除去 糊狀物中的氣泡。
 
  制備完成后還需要將涂好的薄層板水平放置于室溫下晾干,然后放在烘箱內加熱活化。(硅膠板需在烘箱內慢慢升溫至105-110度后保溫30分鐘;氧化鋁板需在200-220度烘4小時)
 
  3.點樣
 
  將待測樣品溶在極性盡可能低的溶劑中配成1%的溶液。用一支平口的細毛細管蘸取少量樣品溶液點在薄板上。
 
  4.展開
 
  薄層層析有多種展開方式,可分為上行、下行、雙向展開等,這里介紹一下上行法和下行法。
 
  上行法:在缸中加入足夠量的展開劑,將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,密封缸蓋,待展 開前沿離薄板上端1cm時,取出薄層板,并用鉛筆輕輕畫下溶劑前沿,晾干。
 
  下行法:在展開缸的蓋子上裝一個小 鉤,將展開的紙片鉤住,并通過一濾紙條將展 開劑和紙片連起來。待展開劑前沿離紙片下端 1cm時,取出紙片,并用鉛筆輕輕畫下溶劑前 沿,晾干。
 
  5.顯色
 
  晾干薄板溶劑后對板上的組分進行定位。將顯色劑以噴霧方式直接噴到薄層板上可顯示不同顏色的斑點。此外對于無色樣品,可采用帶熒光劑的吸附劑做薄板,展開后在紫外光下顯暗色斑點;對于在光學條件下不顯色的物質,可將薄板置于含有少量碘晶體的密閉容器中,與碘作用呈棕色斑點。
 
  6.Rf值計算
 
  用尺測量原點到色斑中心的距離除以原點到溶劑前沿的距離。不同的物質往往有著不同的Rf值,根據這個就可以簡單判斷它們是否是同一物質,但Rf值相同之后,還要進行進一步判斷才能確定他們是否為同一個物質。

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