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　　色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)在高壓液相色譜中的應(yīng)用
 

　　色譜作為一種分離技術(shù)與方法，自本世紀(jì)初起已經(jīng)有100多年的歷史了，現(xiàn)在已經(jīng)成為分析化學(xué)學(xué)科中的一個(gè)重要的分支。在人類進(jìn)入新時(shí)代之際，人們面臨著在信息科學(xué)、生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域的快速發(fā)展的挑戰(zhàn)，在這些領(lǐng)域人才的需求成為國(guó)家高度發(fā)展的至關(guān)重要的因素。而色譜技術(shù)是生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)*的手段和工具。根據(jù)近的統(tǒng)計(jì)在*各類分析儀器中氣象色譜儀和液相色譜儀的營(yíng)銷總額占25%-30%。
 

　　科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使得色譜技術(shù)也得到進(jìn)一步的發(fā)展，不斷有新的聯(lián)用的技術(shù)得到應(yīng)用。生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展，也不斷要求高靈敏和高選擇性的方法對(duì)研究的對(duì)象進(jìn)行定性和定量的研究。
 

　　1 色譜柱的相關(guān)性質(zhì)
 

　　1.1 色譜柱的定義：裝填有固定相用以分離混合組分的柱管。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。
 

　　1.2 分類：色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。簡(jiǎn)單而言：常見的分配住填料：碳十八柱(ODS/C18)、碳八柱(Octy了/C8)、碳六柱(Hexyl/C6)、碳四柱(Butyl/C4)、碳一注(Methyl/C1)、陰離子交換柱(SAX)、陽離子交換柱(SCX)、苯基柱(Phenyl)、氨基柱(Amino/NH2)、氰基柱(Cyano/CN/Nitrile)。常見的吸附柱填料：硅膠柱
 

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　　色譜柱的選擇會(huì)直接影響混合物中組分的分離。舉例來講：對(duì)于填充柱而言，可選擇的固定相較多，柱容量較大，但是受柱長(zhǎng)的限制，分離能力有限，主要應(yīng)用于簡(jiǎn)單化合物的分離。
 

　　2 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)
 

　　2.1 色譜柱的維護(hù)。我們?cè)谑褂眯碌纳V柱應(yīng)該在我們自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來測(cè)定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試。而且在使用的過程中常常有堵塞的現(xiàn)象，造成這種現(xiàn)象的主要原因是①溶劑中的不溶物②樣品中的不溶物③泵進(jìn)樣器等中的不溶物④柱內(nèi)不溶物的形成等。如果當(dāng)色譜柱堵塞以后我們可以對(duì)色譜柱進(jìn)行修復(fù)，首先，使用含鹽緩沖液后(如離子對(duì)試劑)應(yīng)用溶解性強(qiáng)的溶劑(如水)進(jìn)行沖洗。其次，先斷開檢測(cè)器，然后用對(duì)來自樣品中的物質(zhì)有強(qiáng)溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗，對(duì)于反相色譜柱，可使用甲醇、乙睛、、氯仿、庚烷等，在此條件下，應(yīng)避免溶劑的pH低于2或高于8。后如果經(jīng)過上述還是沒有修復(fù)，色譜柱壓力還是沒有下降，則要斷開檢測(cè)器，將色譜柱反方向放置，然后檢查柱壓，若壓力穩(wěn)定下降，則保持色譜柱反方向連接，用低于0.5 ml/min 流速?zèng)_洗一小時(shí)。如果壓力不下降，則要看內(nèi)置過濾器是否被堵塞，如果被堵塞應(yīng)沖洗或更換，若進(jìn)口端的填料發(fā)生堵塞，柱子將不可能被*恢復(fù)，只能通過去掉進(jìn)口端的部分填料，重新填充進(jìn)行有限的柱效恢復(fù)。而且修復(fù)的厚度是2-5mm。
 

　　2.2 色譜柱的保養(yǎng)。色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。我們?cè)趯?duì)色譜柱使
 

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　　用前進(jìn)行測(cè)試以后，我們要根據(jù)不同的情況對(duì)色譜柱進(jìn)行保養(yǎng)：①反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。②長(zhǎng)期保存色譜柱：如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水(含防腐劑*或柳硫汞)中，并將購(gòu)買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度是室溫。
 

　　概括起來就是：①柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)；②當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈；③要注意流動(dòng)相的脫氣；④避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；⑤進(jìn)樣樣品要提純；⑥嚴(yán)格控制進(jìn)樣量；⑦每天分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品；⑧每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗虎崛舴治鲋L(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉。
 

　　3 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)在高壓液相色譜中的應(yīng)用
 

　　高效液相色譜(HPLC)是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離測(cè)定的重要手段。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析。高效液相色譜柱是消耗品，會(huì)隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)增加，出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰，柱效下降。需要定期進(jìn)行*清洗和再生，不同的色譜柱清洗方法各不相同比如：
 

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　　3.1 反相柱 分別用甲醇:水=90:10，純甲醇(HPLC級(jí))，異丙醇(HPLC級(jí))，二氯甲烷(HPLC級(jí))等溶劑作為流動(dòng)相，依次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。
 

　　3.2 正相柱 分別用正己烷(HPLC級(jí))，異丙醇(HPLC級(jí))，二氯甲烷(HPLC級(jí))，甲醇(HPLC級(jí))等溶劑做流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷，所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水。
 

　　3.3 離子交換柱 長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
 

　　另外，還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了，可以調(diào)回來，但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。
 

　　加強(qiáng)色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)對(duì)于色譜柱高壓液相色譜中應(yīng)用有著重要的意義，制定色譜柱管理的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程并嚴(yán)格執(zhí)行。每一根新購(gòu)進(jìn)的色譜柱必須造冊(cè)登記，內(nèi)容包括：生產(chǎn)公司、品名、型號(hào)、規(guī)格、購(gòu)進(jìn)時(shí)間、啟用時(shí)間、單價(jià)、柱內(nèi)保護(hù)溶液等。色譜柱分類存放，硅膠柱、化學(xué)鍵合硅膠柱、氰基或氨基柱、離子交換樹脂柱、凝膠柱各用一個(gè)色譜柱盒，盒上貼上標(biāo)簽，注明類別。隨柱說明書裝入密實(shí)袋附在登記本上。每啟用一根色譜柱，在色譜柱上貼上標(biāo)簽，注明啟用日期。每根柱子每?jī)蓚€(gè)月保養(yǎng)一次，特別是對(duì)于一些使用頻率少的柱子，因?yàn)榉胖脮r(shí)間長(zhǎng)，容易干柱，每一次做好保養(yǎng)記錄。對(duì)于確已失效的柱子，做好停用記錄，不能隨意丟棄，專門存放，如果現(xiàn)用的柱子的填料需要*，可以用存放的柱子的
 

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　　填料。在從事生產(chǎn)的單位的質(zhì)檢部門，對(duì)于使用時(shí)間較長(zhǎng)柱效降低的柱子，可把它用于檢測(cè)產(chǎn)品的中間體。
 

　　加強(qiáng)色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)對(duì)于高壓液相色譜的發(fā)展有著重要的意義，高壓液相色譜系統(tǒng)其中就包括色譜柱，因此，加強(qiáng)色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)有利于高壓液相色譜的發(fā)展，推動(dòng)我國(guó)的醫(yī)療事業(yè)的發(fā)展。