一 實驗目的
1 掌握觀察霉菌形態的基本方法,并觀察其形態特征
2 掌握觀察放線菌形態的基本方法,并觀察放線菌的形態特征
二 實驗原理
1 霉菌的原理
霉菌菌絲較粗大,細胞易收縮變形,而且孢子很容易飛散,所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片其特點是(a)細胞不變形;(b)具有殺菌防腐作用,且不易干燥,能保持較長時間;(c)溶液本身呈藍色,有一定染色效果。霉菌的菌絲、分生孢子梗和分生孢子的形態常作為分類的重要依據。
2 放線菌原理
放線菌在固體培養基上呈輻射狀生長而得名。放線菌是由不同長短的纖細的菌絲所形成的單細胞菌絲體。菌絲體分為兩部分,即潛入培養基中的營養菌絲(或稱基內菌絲)和生長在培養基表面的氣生菌絲。有些氣生菌絲分化成各種孢子絲,呈螺旋形、波浪形或分枝狀等。孢子常呈圓形、橢圓形或桿形。氣生菌絲及孢子的形狀和顏色常作為分類的重要依據。
三 實驗器材
1 菌種:在生化培養箱培養48-72h的曲霉(Aspergillus sp.),青霉 (Penicillium sp.),根霉(Rhizopus sp.), 培養72-120h的5406放線菌(細黃鏈霉菌).
2 染色液和試劑:乳酸石炭酸棉藍染色液,生理鹽水,石炭酸復紅染液,呂氏堿性美藍染液. 3 器材:土豆培養基平板或查氏培養基平板,高氏1號培養基平板, 接種環,載玻片,蓋玻片,鑷子,酒精燈等
四 實驗方法
(一) 霉菌觀察:
1 直接觀察: 將培養3—4天的霉菌培養皿打開,放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣,直接觀察菌絲,分生孢子梗和分生孢子。 2 染色觀察: 于潔凈載玻片上,滴一滴乳酸石炭酸棉藍染色液,用鑷子從霉菌菌落的邊緣外取少量帶有孢子的菌絲置染色液中,再細心地將菌絲挑散開,然后小心地蓋上蓋玻片,注意不要產生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察,必要時再換高倍鏡。
(二) 放線菌觀察:
1.放線菌自然生長狀態的觀察
將在生化培養箱培養3—4天的放線菌培養皿打開,放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣,直接觀察菌絲,孢子絲和孢子。 2.染色觀察
(1)用接種鏟或鑷子連同培養基挑取放線菌菌苔置載玻片*。
(2)用另一載玻片將其壓碎,棄去培養基,制成涂片,干燥、固定。
(3)用呂氏堿性美藍染液或石炭酸復紅染液染0.5—1分鐘,水洗。
(4)干燥后,用油鏡觀察營養菌絲,孢子絲及孢子的形態。
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