1)菌種試管斜面(活化)培養基及母種擴大培養基
馬鈴薯瓊脂糖培養基:馬鈴薯(去皮)200 g 、葡萄糖20 g、瓊脂15~20g、蒸餾水1000 ml , pH自然。試驗用量為1/5。
① 稱量 取去皮馬鈴薯40g,葡萄糖兩份,每份2g,瓊脂1.5-2.0g。瓊脂加入的量取決于瓊脂的質量,質量差的應適當增加。
② 將馬鈴薯切成小塊,放入鍋中,加水200mL,煮沸30 min。用雙層紗布濾去馬鈴薯殘渣,濾液加蒸餾水定容到200mL,攪拌均勻。
③ 取100mL濾液,裝入250mL的錐形瓶內,加入2g葡萄糖,攪拌使糖溶解,然后加塞包扎,等待滅菌。該培養基即為酵母菌擴大培養的液體PDA培養基。
④ 將剩余100mL馬鈴薯濾液放回鍋中,加入瓊脂,加熱熔化。在瓊脂熔化的過程中,需要用玻璃棒不斷攪拌,并控制火力不要使培養基溢出或燒焦。
⑤ 加入2g葡萄糖,葡萄糖溶解后,加入適量的水以補充加熱過程中損失的水分,定容到100mL。
⑥ 分裝 將煮好的培養基分裝于試管中,其量為管高的1/5,滅菌后制成斜面。分裝三角瓶的容量以不超過三角瓶容積之一半為宜。
⑦ 加塞 在管口塞上棉塞。棉塞可過濾空氣,防止雜菌侵入并可減緩培養基水分的蒸發。
⑧ 包扎 加塞后,將試管用線繩捆好,再在棉塞外包一層報紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用一道線繩扎好。用記號筆注明培養基名稱。
⑨ 滅菌 將上述培養基以0.1MPa,121℃,高壓蒸汽滅菌20 min。
⑩ 擱置斜面 將滅菌的試管培養基豎直放置,冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上,擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。
2)進行恒溫搖床培養的PDA液體培養基
① 稱量 取去皮馬鈴薯180g,分別稱取葡萄糖1g、2g、3g各三份。
② 將馬鈴薯切成小塊,放入鍋中,加水900mL,煮沸30 min。用雙層紗布濾去馬鈴薯殘渣,濾液加蒸餾水定容到900mL,攪拌均勻。
③ 分裝 將煮好的培養基分裝于9個錐形瓶中,每支錐形瓶100mL培養基,編號(1)-(9),用記號筆注明置于恒溫搖床。
④ 加葡萄糖,利用1mol/L的氫氧化鈉溶液或1mol/L的鹽酸溶液按照下表調節pH ,并向對應PDA液體培養基(每瓶100mL)中加入相應量的葡萄糖 。
⑤ 加塞 攪拌充分后,在瓶口塞上棉塞。棉塞可過濾空氣,防止雜菌侵入并可減緩培養基水分的蒸發。
⑧ 包扎 加塞后,再在棉塞外包一層報紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用一道線繩扎好。
⑨ 滅菌 將上述培養基以0.1MPa,121℃,高壓蒸汽滅菌20 min,冷卻待用。
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