國產分光光度計在波長準確度和重復性、雜散光,光度準確性和重復性,吸光度范圍,基線穩定性等重要指標上與進口光度計相比有較大的差距,進口產品的波長范圍還可以擴展到近紅外(大紫外)。
由于國產品在測量數據的準確度和重現性,以及測量范圍、可擴展附件等方面的不足,一些測試工作需要使用進口分光光度計。
一般教學用途及要求的,建議使用國內分光光度計;科學研究等特殊要求的,建議采購進口分光光度計。
分光光度計,又稱光譜儀(spectrometer),是將成分復雜的光,分解為光譜線的科學儀器。主要用于進行以下定性定量分析:檢定物質、與標準物及標準圖譜對照、比較吸收波長吸收系數的一致性、純度檢驗、推測化合物的分子結構、絡合物組成及穩定常數的測定
分光光度計原理
分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系如下式:
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度;
I0為入射的單色光強度;
I 為透射的單色光強度;
T 為物質的透射率;
k 為摩爾吸收系數;
L 為被分析物質的光程,即比色皿的邊長;
c 為物質的濃度;
物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標準品或對照品同時操作。
分光光度計類型
分光光度計是一種分析測量光譜的儀器,因為需求的不同,分光光度計有著不同的種類,比如可見分光光度計、紫外可見分光光度計、紅外分光光度計、熒光分光光度計和原子吸收分光光度計等等,下面為大家介紹幾種常見的分光光度計種類區別是什么。
幾種常見的分光光度計種類區別是什么
(1)可見分光光度計
用來測量待測物質對可見光(400~760nm)的吸光度并進行定量分析的儀器,稱為可見分光光度計。可在600nm測定細菌細胞密度。
(2)紫外可見分光光度計
紫外可見光譜儀用來測量待測物質對可見光或紫外光(200~760nm)的吸光度并進行定量分析的儀器。可以測定核酸和蛋白的濃度,也可以測定細菌細胞密度。
紫外分光光度計又可分為單光束,假雙光束,雙光束。它們的用途又有區別。
單光束:適于在給定波長處測量吸光度或透光度,一般不能作全波段光譜掃描,要求光源和檢測器具有很高的穩定性。
雙光束:自動記錄,快速全波段掃描。可消除光源不穩定、檢測器靈敏度變化等因素的影響,特別適合于結構分析。儀器復雜,價格較高。
假雙光束也就是比例雙光束,它的原理是由同一單色器發出的光被分成兩束,一束直接到達檢測器,另一束通過樣品后到達另一個檢測器。這種儀器的優點是可以監測光源變化帶來的誤差,但是并不能消除參比造成的影響。
(3)紅外分光光度計
一般的紅外光譜是指大于760nm的紅外光譜,這是研究有機化合物的光譜區域,能分析各種狀態(氣、液、固)的試樣。
紅外光譜法的特點是:快速、樣品量少(幾微克-幾毫克),特征性強(各種物質有其特定的紅外光譜圖)、能分析各種狀態(氣、液、固)的試樣以及不破壞樣品。
(4)熒光分光光度計
熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。應用于科研、化工、醫藥、生化、環保以及臨床檢驗、食品檢驗、教學實驗等領域。
通過對這些參數的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化,從而闡明分子結構與功能之間的關系。
(5)原子吸收分光光度計
該法主要適用樣品中微量及痕量組分分析常規儀器之一。是材料分析及質量控制部門進行常量、微量金屬(半金屬)元素分析的有力工具。
分光光度計儀器組成
分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。
分光光度計使用方法
1.接通電源,打開儀器開關,掀開樣品室暗箱蓋,預熱10分鐘。
2.將靈敏度開關調至“1”檔(若零點調節器調不到“0”時,需選用較高檔。)
3.根據所需波長轉動波長選擇鈕。
4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內,使空白管對準光路。
5.在暗箱蓋開啟狀態下調節零點調節器,使讀數盤指針指向t=0處。
6.蓋上暗箱蓋,調節“100”調節器,使空白管的t=100,指針穩定后逐步拉出樣品滑竿,分別讀出測定管的光密度值,并記錄。
7.比色完畢,關上電源,取出比色皿洗凈,樣品室用軟布或軟紙擦凈。
注意事項
1.該儀器應放在干燥的房間內,使用時放置在堅固平穩的工作臺上,室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風,防止燈泡燈絲發亮不穩定。
2.使用本儀器前,使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理,以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,應該對儀器的安全性能進行檢查,電源接線應牢固,通電也要良好,各個調節旋鈕的起始位置應該正確,然后再按通電源開關。
3.在儀器尚未接通電源時,電表指針必須于“0”刻線上,若不是這種情況,則可以用電表上的校正螺絲進行調節。
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