殺稻瘟菌素 S（Blasticidin S) 常用試劑
殺稻瘟菌素 S（Blasticidin S) 常用試劑
產品濃度：10mg/ml
Selection antibiotic: cell culture tested, sterile reagent
作用機理：
Blasticidin S是一種來自Streptomyces griseochromogenes的核苷類抗生素，通過干擾核糖體中肽鍵的形成來特異性地抑制原核和真核生物的蛋白質合成。Blasticidin S用于篩選攜帶有bsr或BSD耐受基因的轉染細胞。殺稻瘟菌素具有快速而強效的作用模式，很低的抗生素濃度便能導致細胞迅速死亡。
抗性基因：
目前已經克隆和測序的殺稻瘟菌素耐受基因有3種，一種是分離自產生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基轉移酶基因bls，另外兩種是脫氨酶基因，包括從Bacillus cereus 中分離的bsr和從Aspergillus terreus 中分離的BSD 基因。Bsr和 BSD基因是常用的篩選標志，用于哺乳動物和植物細胞的基因轉移實驗，也可用于E.Coli。
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。收到產品后放到-20 oC保存，有效期至少1年，避免反復凍融。
應用濃度：
1）Escherichia coli
E. coli對Blasticidin S的敏感性稍差，但是轉化子對Blasticidin S具有耐受性，可以用低鹽LB培養基（pH 8）進行篩選，濃度范圍為50-100 μg/ml Blasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。
2）哺乳動物細胞
哺乳動物細胞中Blasticidin S的工作濃度范圍在1-50 μg/ml。初次實驗建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度。
- 25-100 µg/ml in bacteria
- 1-30 µg/ml in mammalian cells
操作步驟（哺乳動物穩轉株篩選）：
Blasticidin S通常使用濃度為10 μg/ml。攜帶bsr或BSD基因的質粒轉染到細胞中，在含有Blasticidin S的正常生長培養基中孵育，用于篩選穩定轉染細胞株。
（1）轉染后48h，用含有適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養基將細胞傳代（注：細胞處于活躍分裂期時抗生素工作最好。細胞密度太高，抗生素效率降低。細胞分盤時覆蓋率最好不超過25%）；
（2）每3-4天去除培養基，加入含抗生素的新鮮培養基；
（3）7天后檢測細胞集落形成。根據宿主細胞種類和轉染/篩選效率，集落形成可能需要增加一周或更久。
（4）轉移5-10個耐受克隆到35mm細胞盤中，加入選擇培養基維持培養7天。隨后用細胞毒性實驗進行檢測。
