上海安景科技有限公司在上海區域*代理和服務的產品有:1. 美國 Bio-Rad公司生命科學研究產品 2. 瑞士TECAN公司多功能酶標儀系列及洗板機系列及自動化工作站;3. 瑞士Hamiltion 公司三維細胞培養儀及低溫儲存系統;4. 美國Thermo Scientific Superfrost Plus&Colorfrost Plus防脫玻片產品系列(全國*代理)
運用DGGE搜尋未知突變
DGGE 是基于以下原理,即增加聚丙烯酰胺凝膠內變性劑的濃度會熔解雙鏈DNA 的不同區域。當溫度達到zui低熔解度區域的熔解溫度Tm 時,DNA 部分熔解,在凝膠中形成遷移率下降的分支分子(Myers et al.1987)。在均一的運行溫度(50—65°C)和尿素與甲酰胺線性變性梯度條件下即形成了變性環境。梯度以垂直或平行于電泳方向形成。DGGE 是zui靈敏的突變檢測方法,其效率可達99%(Grompe 1993)。DCode 系統通過以下途徑優化DGGE:
DGGE 的兩種模式。A ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向垂直。從原生乳腺癌種擴增的p53 基因6 號外顯子的野生型和突變型等位基因通過垂直DGGE(80V,56°C,2 小時)分離。感謝AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的數據。B ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向平行。p53 基因8 號外顯子的野生型和突變型等位基因在8%丙烯酰胺:甲叉37.5:1 平行梯度(40–65% 變性劑)凝膠上,1 x TAE 緩沖液, 60°C,150 V,電泳2.5 個小時。左泳道,突變型等位基因;中,野生型等位基因;右,突變型與野生型等位基因。
DGGE分離示意圖。所示為一個變性梯度方向與電泳方向垂直的凝膠,以及一個有單個熔解區域的目標序列。野生型和突變型樣品加入到制備孔內。在低變性劑濃度時,DNA的片段為雙鏈,但當濃度增加時雙鏈DNA 開始熔解,形成分枝分子。到濃度非常高時,DNA的片段可熔解形成2條單鏈。
運用DGGE搜尋未知突變
DGGE 是基于以下原理,即增加聚丙烯酰胺凝膠內變性劑的濃度會熔解雙鏈DNA 的不同區域。當溫度達到zui低熔解度區域的熔解溫度Tm 時,DNA 部分熔解,在凝膠中形成遷移率下降的分支分子(Myers et al.1987)。在均一的運行溫度(50—65°C)和尿素與甲酰胺線性變性梯度條件下即形成了變性環境。梯度以垂直或平行于電泳方向形成。DGGE 是zui靈敏的突變檢測方法,其效率可達99%(Grompe 1993)。DCode 系統通過以下途徑優化DGGE:
DGGE 的兩種模式。A ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向垂直。從原生乳腺癌種擴增的p53 基因6 號外顯子的野生型和突變型等位基因通過垂直DGGE(80V,56°C,2 小時)分離。感謝AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的數據。B ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向平行。p53 基因8 號外顯子的野生型和突變型等位基因在8%丙烯酰胺:甲叉37.5:1 平行梯度(40–65% 變性劑)凝膠上,1 x TAE 緩沖液, 60°C,150 V,電泳2.5 個小時。左泳道,突變型等位基因;中,野生型等位基因;右,突變型與野生型等位基因。
DGGE分離示意圖。所示為一個變性梯度方向與電泳方向垂直的凝膠,以及一個有單個熔解區域的目標序列。野生型和突變型樣品加入到制備孔內。在低變性劑濃度時,DNA的片段為雙鏈,但當濃度增加時雙鏈DNA 開始熔解,形成分枝分子。到濃度非常高時,DNA的片段可熔解形成2條單鏈。
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