蛋白A可與多數(shù)哺乳動物IgG的Fc端特異性結合。使用的rec-Protein A是通過基因工程-重組蛋白的方法表達獲得。由于重組表達的rec-Protein A去除了除Fc端以外的其他非特異性結合位點，特異性更好。本產(chǎn)品采用“高配基、高濃度、小體積”的創(chuàng)新偶聯(lián)技術，將填料中有限的羥基(-OH)結合位點充分活化，使得單位體積中結合更多蛋白A，終純化效率較普通偶聯(lián)有30%的提高。蛋白A偶聯(lián)填料可直接用于血清、腹水中IgG抗體純化，或用于含F(xiàn)c片段的重組蛋白的純化。蛋白A可與多數(shù)哺乳動物IgG的Fc端特異性結合。使用的rec-Protein A是通過基因工程-重組蛋白的方法表達獲得。由于重組表達的rec-Protein A去除了除Fc端以外的其他非特異性結合位點，特異性更好。本產(chǎn)品采用“高配基、高濃度、小體積”的創(chuàng)新偶聯(lián)技術，將填料中有限的羥基(-OH)結合位點充分活化，使得單位體積中結合更多蛋白A，終純化效率較普通偶聯(lián)有30%的提高。蛋白A偶聯(lián)填料可直接用于血清、腹水中IgG抗體純化，或用于含F(xiàn)c片段的重組蛋白的純化。

l  產(chǎn)品技術指標

    rec-Protein A/Sepharose 比值：2.8~3.5mg rec-Protein A/ml Sepharose

    rec-Protein A分子量：34.85 KDa

    每分子rec-Protein A可結合IgG位點數(shù)：4個

    rec-Protein A可結合白蛋白位點數(shù)：無

    線性流速：300-500 cm/h

    耐壓指數(shù)：≤0.3 MPa（填料）

l  注意事項

請在實驗前仔細閱讀本rProtein A預裝柱使用說明。同時，將所要的所有試劑、耗材拿出置于室溫，恢復至室溫使用。

l  產(chǎn)品保存

產(chǎn)品儲存于2-8℃，保質(zhì)期兩年。 

l  rec-Protein A預裝柱純化IgG抗體步驟

以下實驗方法適用于從血清或腹水中純化IgG抗體，不同來源的IgG與rec-Protein A的結合能力不同，具體情況請參考表1。

1. 將血清或腹水樣品（*上樣量2 mL樣品/mL柱）裝入截留分子量3.5 KDa透析帶中，于4 ℃冰箱中對1× PBS（pH 7.4）透析過夜；

2. 將rec-Protein A-Sepharose裝柱固定好，用10倍柱體積1× PBS（pH 7.4）平衡層析柱，建議流速為1 mL/min；

3. 將透析好的樣品從層析柱上端加入，建議流速為1 mL/min，為了獲得更好的抗體結合效果可將流穿液再上樣，重復2遍（或?qū)悠?次性加入層析柱后置于搖床上，輕輕搖動，結合30 min）；

4. 樣品結合后，用20倍柱體積1× PBS(pH 7.4)洗滌層析柱，建議流速為1 mL/min，勿讓層析柱滴干；

5. 洗脫IgG，向?qū)游鲋隙思尤胂疵撘海?00 mM*，pH 2.7），用預先加有100 μL中和緩沖液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱體積，進行10 % SDS-PAGE電泳，確定IgG樣品所在管，回收樣品。

6. 用5倍柱體積再生緩沖液（100 mM*，pH 2.0）進行再生處理，再加入10倍柱體積ddH2O清洗層析柱。后于層析柱中加入10倍柱體積, 20% Ethanol，4~8 ℃冰箱保存處理。

l 同類產(chǎn)品純化效果比較

  美國某的rProtein A Sepharose 4FF 親和層析柱對人血清進行純化，其對人IgG的大結合量約為34 mg/mL Medium。 

表1 rProtein A與不同來源Ig的反應活性情況

表2 rProtein A預裝柱系列產(chǎn)品參數(shù)